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RACE技術

更新時間:2021-12-15

簡要描述:

RACE技術是采用PCR 技術由已知的部分cDNA 順序來擴增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。

RACE技術實驗原理

      RACE技術是采用PCR 技術由已知的部分cDNA 順序來擴增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。

3'RACE

利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準*鏈cDNA.然后用一個基因特異引物GSP1(gene specific primer,GSP)作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為下游引物,以cDNA*鏈為模板,進行PCR循環,把目的基因3' 末端的基因片

段擴增出來。



5'RACE

先利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準*鏈cDNA.利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到*鏈的5'末端時自動加上3-5個(dC)殘基,退火后(dC)殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接頭引物配對后,轉換為以SMART序列為模板繼續延伸而連上通用接頭(見Figure 2 )。然后用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為上游引物,用一個基因特異引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作為下游引物,以SMART*鏈cDNA為模板,進行PCR循環,把目的基因5'末端的c基因 片段擴增出來。終,從2個有相互重疊序列的3'/ 5'-RACE產物中獲得全長cDNA,或者通過分析RACE產物的3'和5'端序列,合成相應引物擴增出全長cDNA。



實驗流程:

1、總RNA提取以及cDNA反轉錄

2、根據已知序列設計引物,以cDNA模板進行擴增,驗證序列正確性

3、RACE 擴增,并測序,使用錨定PCR(AnchoredPCR)與巢式PCR(Nested PCR)相結合的方法,分別進行3'末端和5'末端RACE并對其產物進行測序

4、根據測序結果拼接目的基因全長cDNA序列

5、將RACE產物進行TA克隆用于后續研究(可根據客戶要求自行選擇)

服務優勢

采用進口試劑,確保實驗準確性

較同類產品方法更快速,便捷

豐富的項目經驗,超過500例的成功案例

提供全套的后續生物信息學分析服務(可根據客戶要求提供個性化分析服務)

服務流程

1、確認客戶提供的序列信息

2、評估RACE實驗可行性

3、確認樣本信息

4、根據客戶提供的信息設計好實驗方案,銷售做出報價合同

4、客戶確定無誤后簽訂《沃森生物-RACE檢測服務合同》,并簽字(或蓋章)

5、支付預付款,服務正式啟動

6、根據合同實驗方案開展實驗

8、實驗結束后,發送初步實驗報告

9、支付實驗尾款

10、提供詳細實驗報告,完成實驗項目

材料提交說明

實驗樣品

1、組織或者細胞:提供盡可能多的新鮮組織或細胞樣品(包括3個技術重復),組織樣品不少于200 mg,細胞至少107個

2、RNA樣品:3’ RACE:Total RNA>15μg;5’ RACE:Total RNA>25μg(注:OD260/OD280在1.9-2.1之間,完整性好)

序列信息:

1、大于200bp的已知序列(請注明已知序列的5’ 端及3’ 端):如果已知序列比較短,建議先進行3’ RACE再進行5’ RACE,以提高實驗的成功率

2、實驗數據和參考文獻:這將會幫助我們更好地理解您的實驗背景,有利于實驗的順利進行

結果交付

實驗結題報告:包括實驗步驟,引物信息,實驗過程 PCR產物照片,全長序列拼接結果;

測序原始數據:測序彩色波形圖、堿基序列圖;

實驗產物:引物、PCR產物、測序用質粒(限產生克隆測序的情況)。


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