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fish技術服務

更新時間:2022-05-10

簡要描述:

fish技術服務(Florescence In-Situ Hybridization簡稱FISH)是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術。

  fish技術服務(Florescence In-Situ Hybridization簡稱FISH)是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術。它將熒光信號的高靈敏度、安全性,熒光信號的直觀性和原位雜交的高準確性結合起來,通過熒光標記的DNA探針與待測樣本的DNA進行原位雜交,在熒光顯微鏡下對熒光信號進行辨別和計數,從而對染色體或基因異常的細胞、組織樣本進行檢測和診斷,為各種基因相關疾病的分型、預前和預后提供準確的依據。自20世紀80年代末,Pinkel和Heiles將FISH技術引入染色體檢測領域后,FISH技術就在臨床診斷及科研工作中得到了廣泛的運用,顯示出與一些傳統技術相比的明顯優勢。

 

  熒光原位雜交技術fish技術服務與傳統的免疫組織化學法(IHC)相比,FISH具有良好的穩定性和可重復性。目前免疫組織化學法正廣泛應用于腫瘤等多個領域的臨床診斷。免疫組化的檢測對象是疾病相關的蛋白。由于蛋白的表達和本身的構象受各種因素的影響很大(例如酸、堿和變性劑),檢測條件的穩定性對檢測結果至關重要。此外,免疫組化檢測結果的判斷依賴于檢測者對顯色結果的主觀判斷,對于一些弱陽性的結果,不同的檢測者容易產生分歧。上述的因素都可能影響醫生對病情的終診斷。

 

  熒光原位雜交技術fish技術服務的對象是細胞中的DNA,致密的雙螺旋結構使DNA可以歷經千百萬年而依然保持良好,其結構穩定,不易被環境條件影響,為熒光原位雜交技術的穩定提供了良好的基礎。此外,熒光原位雜交結果的判定借助于對熒光的顏色判斷和信號計數,客觀地量化了檢測地結果。如果借助于相應的FISH操作系統(例如Abbott-Vysis公司的Hybrit雜交儀和VP2000樣本預處理系統)和染色體成像系統就能實現整個FISH操作的自動化,大限度的降低操作者和檢測者的主觀因素,確保結果的準確性。

 

  PCR由于靈敏度高,操作簡便快捷是近年來應用比較多的基因診斷技術,但PCR診斷技術的假陰性和假陽性的比例較高,對同一樣本也只能作一次分析,不能重復實驗結果。隨著探針技術的不斷發展,FISH目前的靈敏度已經接近或達到PCR的水平,并能很好彌補PCR技術的局限。熒光原位雜交技術fish檢測不僅有極低的假陽性、假陰性的比例(以Abbott-Vysis的產前診斷探針為例,29,000例的使用結果證實正確率高達99.9%),還能對同一樣本進行多次的FISH操作以及利用不同顏色的熒光探針一次檢測多個染色體或基因的異常,大大節省了檢測的時間。此外,通過fish技術服務可以對染色體或特定基因的數目異常,特定片斷的缺失、易位和重排進行診斷研究。

 

  熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)技術是一種應用非放射性熒光物質依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示DNA序列位置的方法。該技術具有快速、安全、靈敏度高以及探針可長期保存等特點,目前已廣泛應用于細胞遺傳學、腫瘤生物學、基因定位、基因作圖、基因擴增,產前診斷及哺乳動物染色體進化研究等領域。

 

fish技術服務基本原理

  簡單點說就是堿基互補配對原則,就是我們將外源核酸(也就是常說的分子探針)與組織、細胞上待檢測的DNA或RNA進行配對,形成核酸雜交分子,再經過一定手段將這個雜交分子的位置顯示出來。

 

  探針分類
  ●DNA探針:雙鏈重組DNA(cDNA)探針是目前應用較多的探針類型。特點敏感性高,同樣操作難道及費用較高。
  ●RNA探針:今年來RNA探針應用越來越多,這是由于單鏈RNA探針分子小,在組織內通透性好,用前無需變性,雜交中也不存在退火的情況,可以全部與靶核酸配對雜交
  ●寡核苷酸探針:這類探針多采用DNA合成儀,在不溶性硅石支持物上合成單鏈DNA寡核苷酸。
  核酸雜交的穩定性依次為:

  RNA—RNA>DNA—RNA>DNA—DNA

 

應用

  fish技術服務已經在細胞遺傳學、腫瘤生物學、基因定位、基因作圖、基因擴增、產前診斷及哺乳動物染色體進化研究等領域得到了廣泛應用。

 

  一、染色體結構變異與非整倍體的檢測

  熒光原位雜交簡化了染色體結構變異的檢測。如植物染色體的非整倍體是由于染色體行為異常,即可能是雙親配子染色體數目和結構差異引起或染色體親緣關系較遠等因素導致。利用原位雜交可比較容易地檢測出缺失、附加或替換的染色體。

 

  二、基因擴增和缺失的檢測

  FISH空間分辨率和敏感性使得親本和擴增基因在抗病蟲害細胞中定位成為可能。被擴增基因主要在同一染色體臂上,但離初始親本基因有一定距離,且經常獨立地位于染色體端粒部位;FISH分析表明細胞斷裂可能是由于染色體含有擴增區域的結構重排。同時用FISH 可定位轉基因植物中外源基因位置和拷貝數,此法在番茄、煙草、大麥、小麥、黑麥等作物中已獲成功。利用FISH技術也可檢測一些與遺傳性疾病相關的基因缺失,如成功檢測了aniridia疾病患者的缺失基因。

 

  三、基因定位

  熒光原位雜交的基因定位技術有著廣泛的應用。PP2Ac突變型肺癌相關基因在染色體區域的定位,熒光顯微鏡下觀察記錄和分析雜交信號的特征。結果在正常人淋巴細胞的染色體5q23-31可見明顯雜交信號,在GLC-82細胞的5號和7號染色體上出現較強信號。說明點突變引起PP2Ac活性改變,從而基因易位,導致肺腫瘤的產生。FISH技術與生化、計算機和重組DNA技術結合檢測Alu位點,表明DNA序列與帶型有關。用FISH技術對人類基因組中編碼基因分布的研究揭示,基因主要集中在染色體上G+C(占全基因組35% )的DNA區段。FISH技術為著絲粒結構研究提供了重要手段。應用FISH技術可直接觀察染色體端粒,這簡化了染色體在核內的結構和功能研究。

 

  四、基因作圖
  用fish技術服務可直接檢測DNA在染色體上的位置,所確定位置是基因在染色體上實際的物理位置。由于原位雜交不受位點內變異和位點間拷貝數的影響,FISH技術已成為重復序列和多基因家族作圖的重要手段。多色探針標記為探針定位提供了一種更簡便的方法。如檢測時2個探針用紅色,第3探針用綠色,則綠色位點的位置要么在2紅色位點之外,要么在它們之間,于是可確定探針順序。因此,探針被至少20kbp的序列隔開就可以用FISH技術將之定位。

 

 

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