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腺病毒包裝

更新時間:2021-12-21

簡要描述:

腺病毒包裝(Adenovirus,Ad)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒,其復制不依賴于宿主細胞的分裂。有近50個血清型,大多數Ad載體都是基于血清型2和5,通過轉基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的復制能力。這些重組病毒僅在高水平表達E1和E3基因的細胞中復制,因此是一種適用于治療的高效控制系統。

       腺病毒包裝(Adenovirus,Ad)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒,其復制不依賴于宿主細胞的分裂。有近50個血清型,大多數Ad載體都是基于血清型2和5,通過轉基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的復制能力。這些重組病毒僅在高水平表達E1和E3基因的細胞中復制,因此是一種適用于治療的高效控制系統。

       重組腺病毒(AdV)是人血清5型腺病毒(Ad5),一種復制缺陷的腺病毒載體系統,在基因治療、基礎生命科學研究等領域被廣泛應用。腺病毒缺失了早期表達基因序列E1和E3區。E1是腺病毒復制所必須的,E1的缺失使其不能自身復制,只能依靠包裝細胞如293A細胞提供的反式互補進行復制擴增,以此保證腺病毒的安全性。

       

腺病毒包裝特點:

1)幾乎可以感染所有類型的細胞。


2)可以獲得復制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。


3)病毒滴度高,產生病毒經過濃縮后可以達到1012 PFU/mL,能有效的進行增殖。

注:plaque forming unit/ml,空斑形成單位,感染性滴度的單位一般表示為PFU/ml。


4)腺病毒載體感染宿主的范圍比較廣,制備容易,操作簡單。


5)感染細胞時,不整合到染色體中,不存在激活致癌基因或插入突變等危險,生物安全性高。


腺病毒包裝簡要流程  :

1)構建表達 siRNA/miRNA 的腺病毒載體。


2)采用 PacI 消化純化的質粒。


3)消化好的腺病毒表達載體轉染 293A 細胞,收獲細胞以制備病毒粗提液。


4)將病毒粗提液感染293A細胞以擴增病毒。


5)分裝,-80℃保存。


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